蜡梅花瓣基因组DNA提取及RAPD-PCR反应体系优化

以蜡梅花瓣为试材,用改良CTAB法提取基因组DNA,并设置不同浓度梯度对每个PCR反应因子进行相应试验,结果表明,改良CTAB法提取蜡梅花瓣基因组纯度高、质量好。并采用正交试验设计的方法,对蜡梅RAPD-PCR条件进行了优化,结果表明,最佳的蜡梅RAPD-PCR反应体系(20μL)为:1×buffer,1.0 U TaqDNA聚合酶,2.0 mmol/L MgCl2,0.15 mmol/L dNTPs,0.5μmol/L引物和模板DNA 30～40 ng;适宜的扩增条件为:94℃预变性3 min;94℃变性30 s,38℃退火30 s,72℃延伸90 s,38个循环;72℃延伸7 min,4℃保存。     

4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法比较(英文)

[目的]对4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法进行比较研究,建立滑叶铁线莲最适的DNA提取方法。[方法]以滑叶铁线莲叶片为材料,比较改良CTAB法Ⅰ、改良CTAB法Ⅱ、改良CTAB法Ⅲ、改良SDS法这4种基因组DNA提取法在提取的DNA纯度、浓度和提取时间等方面的不同。[结果]4种方法都可提取滑叶铁线莲基因组DNA。改良CTAB法Ⅰ提取DNA纯度最高,但浓度最低且提取时间最长;改良SDS法提取DNA浓度最高,所需时间较短,但纯度较低;改良CTAB法Ⅲ提取所需时间最短。[结论]建立了铁线莲最适DNA提取方法,为运用分子生物学手段对其研究提供支持。     

乐清湾和三沙湾缢蛏群体遗传多样性的微卫星分析

利用微卫星标记分析了我国浙江乐清湾翁垟(ZWY)、乐成(ZYC)、南岳(ZNY)、南塘(ZNT)、清江(ZQJ)、湖雾(ZHW)、坞根(ZWG)、海山(ZHS)和芦浦(ZLP) 9个群体和福建三沙湾漳湾(FZW)、梅田(FMT)、三都(FSD)、渔江(FYJ)、白招(FBZ)、霞塘(FXT)、长春(FCC)、沙江(FSJ)和溪尾(FXW)9个缢蛏群体的遗传多样性和遗传分化,以期评价乐清湾和三沙湾内缢蛏群体的遗传结构差异,为我国缢蛏主要原产地种质资源保护和遗传育种提供基础资料。遗传多样性结果表明,浙江乐清湾和福建三沙湾内的缢蛏群体中各位点平均有效等位基因数N_e变化范围分别为8.146~10.457和7.457~9.947,平均期望杂合度H_e分别为0.872~0.909和0.846~0.894,Nei’s基因多样性指数分别为0.863~0.899和0.836~0.886,显示乐清湾和三沙湾缢蛏群体的遗传多样性仍处于较高水平。群体间遗传分化指数（F_ST）结果表明,缢蛏各群体间F_ST为0.000 1~0.052 3。基于Nei’s遗传距离（D_A）构建非加权组平均法（UPGMA）系统树结果显示,18个群体聚类为2支,除ZWY和ZWG群体外,ZYC、ZNY、ZNT、ZQJ、ZHW、ZHS 和ZLP浙江群体单独聚为一支;而ZWY、ZWG群体与FZW、FMT、FSD、FSJ、FBZ、FXT、FCC、FSJ 和FXW 9个福建群体聚类在一起,因此推测浙江的ZWY、ZWG群体可能来自福建,揭示在缢蛏的养殖过程中可能存在引苗现象。     

DNA提取方法对转基因甘蔗PCR检测的影响

研究了不同提取方法和不同生长时期甘蔗提取的DNA对转基因甘蔗植株PCR检测的影响。结果表明,幼苗时期提取的甘蔗叶片模板DNA质量高于田间成熟植株;甘蔗幼苗时期的PCR检测易于成熟植株;CTAB法、SDS法和CTAB-SDS法提取的甘蔗叶片DNA均能满足幼苗期甘蔗抗性植株的PCR检测要求;对成熟转基因甘蔗植株而言,以CT...     

野生大豆核基因组Mb级DNA的制备与酶切

以野生大豆黄化幼苗为材料提取其细胞核DNA,经LMP包埋并用蛋白酶K裂解其中的核蛋白后,采用脉冲电泳回收2 Mb左右细胞核DNA.用HindⅢ对回收细胞核DNA进行部分酶切并用脉冲电泳回收酶切后的DNA片段,经电洗脱、浓缩和透析后DNA溶液浓度可达10 ng·μL<,-1>.连接转化检测结果表明:该DNA可用于后续野生...     

生物芯片应用与发展

生物芯片具有高通量、高信息量、快速、所需样品少等优点,已经成为科学研究的热点之一。本文介绍生物芯片的概念,并综述4种生物芯片的主要应用领域及应用现状,同时分析生物芯片技术中存在的问题。尽管生物芯片受到很多相关技术的制约,但仍具有非常广阔的应用前景。     

芭蕉属植物cpDNAL16序列限制性片段长度多态性研究

采用限制性内切酶Sau3AI、MspI、TaqαI、AluI分别对获得的L16基因序列进行理论酶切。通过限制性内切酶酶切后,酶切片段大小相同的记为1,不同的记为0。相似系数和聚类分析应用NTSYS-pc2.01数据分析软件进行,采用Nei的方法计算相似系数,UPGMA方法聚类,绘制树状图。结果表明芭蕉属种间存在较为丰富的cpDNA PCR-RFLP多态性,种内差异性不明显,有些亚种间无法区分开。而M. acuminata 具有丰富的亚种和变种,遗传差异大,多样性丰富。     

金黄色葡萄球菌基因组DNA提取方法的比较

为寻求一种较为实用的金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）基因组DNA提取方法,对酶解法、十二烷基硫酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）法、FDA法、热裂解法等常见的4种不同提取方法进行了改良和比较.结果表明,4种方法中,SDS法提取的DNA质量最好,检测灵敏度高,当金黄色葡萄球菌的DNA稀释至2.95 pg或更少时,SDS法还能够通过PCR将其检测出来;并且该方法的稳定性好,经济性高,是金黄色葡萄球菌基因组DNA理想的提取方法.     

转基因棉籽DNA提取纯化及快速PCR检测研究

以棉籽为原料,探索一种快速、简便的棉籽DNA的提取纯化方法以及PCR检测该棉籽是否为转基因的方法。该方法能从200mg棉籽中提取0.4μg高纯度DNA,用于PCR检测。针对18S rDNA、CaMV35S、NOS、NPTⅡ和CryⅠA(c)等基因进行了棉籽中内外源基因PCR检测,分别扩增出不同的目的片段,为颗粒类产品的外源基因检测提供了可行方法。     

猪圆环病毒2型ORF2基因在PcDNA3.1中的表达效果

[目的]构建猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)ORF2 DNA核酸疫苗,并评价其免疫效果和安全性.[方法]设计一对特异性引物,扩增PCV2-ORF2,利用T载体对其进行克隆,与真核表达载体PcDNA3.1在同等条件下进行双酶切,并进行连接,转化感受态细菌DH5a并克隆,经双酶切鉴定筛选...